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食物微生物查验GB4789.4-2016 沙门氏菌查验及注重事变

公布时间:2021-09-21      阅读次数:1910    分享:

一、沙门氏菌生物学特性

      生物学特性:沙门氏菌属是食源性细菌性肠胃炎的首要病原菌,属于肠杆菌科,革兰氏阳性无芽孢杆菌,养分需求不高,需氧或兼性厌氧。典型菌株多具备周生鞭毛、能静止(除鸡瘟沙门菌和鸡沙门菌外)、大部门菌株产H2S、能合成葡萄糖并产气,最适培育种植提拔温度为37℃,最适pH 7.2~7.6。耐受胆盐,在粪便、泥土、食物、水中可保留5个月至二年之久。

      血清型:沙门菌属由两个种组成:肠道沙门菌(S.enterica)和邦哥沙门氏菌(S.bongori)。今朝已知沙门氏菌血清型有2500多种,

      流行学特色:惹起食物中毒最多见的沙门氏菌囊括鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌。而易惹起沙门氏菌中毒的食物则有肉、蛋、乳类等。

二、沙门氏菌的查验

三、培育种植提拔基原理解析

      1. 缓冲卵白胨水(BPW)

      •其身分中含有磷酸二氢钾和磷酸氢二钠,起缓冲液的作用;

      •卵白胨提供成长养分,无利于毁伤沙门氏菌的复苏。

      2. 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)

      •配方中硫代硫酸钠和碘经氧化天生四硫磺酸钠,它对大肠菌群有抑止作用,对沙门氏菌无影响(因沙门氏菌具备四硫磺酸酶,能合成四硫磺酸钠,而大肠菌群没有这类酶,故成长受抑止);

      •碳酸钙为缓冲剂,可以使沙门氏菌不致因酸碱度改动面灭亡。

      •因为配方含碳酸钙,是以,该培育种植提拔基设置后的终极pH不在7.0±0.2,而是偏碱性。

四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)

      3. 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)

      •卵白胨提供碳源和氮源知足细菌成长的需求;乳糖是可发酵的糖类;亚硒酸氢钠抑止革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大大都革兰氏阳性肠道菌;磷酸盐是缓冲剂;L-胱氨酸为还原剂。

      •使用历程中要注重SC培育种植提拔基不不变,设置时避免适度加热。

亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)

      4. 亚硫酸铋琼脂培育种植提拔基(BS)

      •配方中亚硫酸钠可与柠檬酸铋铵天生亚硫酸铋,抑止革兰氏阳性菌和大肠菌群;硫酸亚铁可发作硫化氢,并与铁反响天生玄色积淀。

      •沙门氏菌在BS上的典型菌落特色:具备金属光芒的棕色或玄色菌落。但有些菌株构成非典型菌落特色:灰绿色的菌落,周围培育种植提拔基不变。

      •BS平板应制备后避光常温保留,并在24h内使用。

亚硫酸铋琼脂(BS)菌落特色

      5. HE琼脂培育种植提拔基

      •配方中胆盐、去氧胆酸钠、溴麝香草酚兰等身分可抑止革兰氏阳性菌成长;酸性复红作为酸碱批示剂的同时,也可抑止阳性菌,但对阳性肠道菌无抑止作用,选择性较弱。硫代硫酸钠可被细菌还原发作硫化氢,与柠檬酸铁铵反响天生玄色硫化亚铁。

      •菌落特色:蓝绿色或蓝色,大都菌落中间玄色或全险些全玄色;有些菌株为黄色,中间玄色或险些全玄色。

HE琼脂菌落特色——鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028

      6. XLD琼脂培育种植提拔基

      •配方中木糖、乳糖和蔗糖身分作为可发酵的碳源,除志贺氏菌外,其他大大都肠杆菌均能发酵木糖;沙门氏菌发酵木糖产酸,构成酸性环境无利于发作脱羧酶使赖氨酸脱羧,从而使培育种植提拔基的pH值升高向碱性变化;在碱性前提下,硫代硫酸钠及柠  檬酸铁铵身分与沙门氏菌发作的硫化氢反响是的菌落的颜色呈玄色;去氧胆酸盐身分可抑止革兰氏阳性菌的成长。

      •菌落特色:菌落呈粉白色,带或不带玄色中间,有些菌株可呈现大的带光芒的玄色中间,或呈现局部玄色的菌落;有些菌株为黄色菌落,带或不带玄色中间。

XLD琼脂菌落特色——鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028

       7. 沙门氏菌显色培育种植提拔基

      •卵白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠可维持均衡的浸透压;琼脂是培育种植提拔基的凝集剂;胆盐抑止革兰氏阳性菌;选择性添加剂加强培育种植提拔基的抑止杂菌的威力;混合色素划分与沙门氏菌和大肠菌群所对应的酶发作特同性反响,水解底物,释放出显色基团,在淡黄色平板上沙门氏菌发作品白色的菌落,大肠菌群发作蓝绿色的菌落。

CRM004 沙门显色培育种植提拔基——鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028

      8. 三糖铁琼脂培育种植提拔基

      •卵白胨、牛肉膏粉提供氮源、维生素、矿物资;乳糖、葡萄糖、蔗糖为可发酵糖类,其产酸时经由过程酚红批示剂测出,酸性呈黄色,碱性呈白色;硫代硫酸钠可被某些细菌还原为硫化氢,与硫酸亚铁铵中的铁盐天生玄色硫化铁;氯化钠维持均衡的浸透压;琼脂是培育种植提拔基的凝集剂。

三铁塘

      9. 赖氨酸脱羧酶试验培育种植提拔基

      •具备氨基酸脱羧酶的细菌,能合成氨基酸使其脱羧天生胺(赖氨酸→尸胺)和二氧化碳,使培育种植提拔基变碱,使批示剂显示进去。

      •结果判读:阳性为试验管为绿色-蓝绿色,对照管变黄色; 阳性为试验管和对照管均变黄色,或均不变色。

赖氨酸脱羧酶试验阳性

      10. 靛基质试验

      •某些细菌能合成卵白胨中的色氨酸,天生吲哚。吲哚的存在可用显色反响施展阐发进去。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合,构成玫瑰吲哚,为白色化合物。

      •结果判读:阳性为滴加靛基质试剂后液面当即变玫白色;阳性为滴加试剂后不变白色。

靛基质试验

      11. 尿素酶试验

      •具备尿素酶的细菌合成培育种植提拔基中的尿素,发作大量的氨,使培育种植提拔呈碱性,酚红批示剂在pH6.8时呈黄色,pH8.1呈粉白色。

      •结果判读:阳性为玫白色; 阳性为淡橙白色-淡黄色。

尿素酶试验

      12. 氰化钾哄骗试验

      •氰化钾是细菌呼吸酶体系的抑止剂,可与呼吸酶作用使酶得到活性,抑止细菌的成长,但有的细菌在必然浓度的氰化钾存在时仍能成长,以此甄别细菌.。

      •结果判读:阳性为试验管和对照管都有成长变混浊; 阳性为试验管廓清不见成长,对照管成长混浊。

氰化钾哄骗阳性结果

      13. 糖(醇)发酵试验

      •绝大大都细菌都能哄骗糖(醇)类作为碳源和动力,可是它们在合成糖(醇)的威力上有很大的差距,有些细菌能合成某种糖(醇)并产酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢、甲烷、二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气。酸的发作可哄骗批示剂来断定。

      •(批示剂为溴甲酚紫)结果判读:阳性为变黄色;阳性为紫色。

甘露醇发酵试验

      14. 沙门氏菌属差别生化反响结果呈现百分率

尝试称号

反响结果

沙门菌比例(%)

三糖铁发酵葡萄糖产酸

阳性

100

三糖铁发酵葡萄糖产气

阳性

91.93

三糖铁发酵乳糖

阳性

99.24

三糖铁发酵蔗糖

阳性

99.5

三糖铁产硫化氢

阳性

91.6

尿素(pH7.2)

阳性

99

赖氨酸脱羧酶

阳性

94.65

ONPG

阳性

98.44

VP

阳性

100

靛基质试验

阳性

98.9

      15. 沙门氏菌断定表

三糖铁

赖氨酸脱羧酶

靛基质

尿素(pH7.2)

弥补尝试

O与H多价

结果断定

斜面

底层

硫化氢

白色

黄色

阳性

阳性

阳性

无需弥补

均凝集

沙门氏菌属

白色

黄色

不产

阳性

阳性

阳性

ONPG阳性

均凝集

沙门氏菌属

黄色

黄色

阳性

阳性

阳性

无需弥补

均凝集

沙门氏菌属

黄色

黄色

不产

阳性

无需测试

无需测试

无需弥补

无需测试

非沙门氏菌

白色

白色

产/不产

阳性/阳性

无需测试

无需测试

无需弥补

无需测试

非沙门氏菌

在接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培育种植提拔基的同时,可间接接种卵白胨水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培育种植提拔基,必然要注重是同一个菌落,这类尝试组合的劣势是可筛选掉更多的非沙门氏菌,削减后续事情量。

上述结果断定仅合用于典型沙门氏菌,如呈现非典型结果,应举行体系生化鉴定和血清学分型举行确认。

      16. 071740 沙门氏菌生化鉴定盒(接种鼠伤寒沙门氏菌的结果)

       17. EasyID 沙门氏菌生化鉴定盒(接种鼠伤寒沙门氏菌的结果)

四、血清试验

      血清学鉴定中的多价菌体(O)和多价鞭毛抗原鉴定是沙门氏菌鉴定的必做名目,血清学分型为选作试验。尝试室必需配备沙门氏菌的多价菌体(O)和多价鞭毛(H)诊断血清。血清学试验必需基于生化结果试验的结果,不克不及单纯以血清学尝试结果来陈述终极。

A-F “O”多价血清凝集                     A-F “O”多价血清不凝集

五、沙门氏菌恒温荧光核酸快捷检测

六、沙门氏菌查验所需培育种植提拔基试剂

用途

货号

称号

规格

前增菌

023130

缓冲卵白胨水(BPW)

  瓶(干粉)250g

CP0680

缓冲卵白胨水(BPW)

  盒(袋装)225 mL×10袋

CP0290

缓冲卵白胨水(BPW)

  盒(瓶装)225 mL×6瓶

CP0560A

缓冲卵白胨水(BPW)

  盒(管装)9 mL×20支

023130P1

缓冲卵白胨水(BPW)

  瓶(颗粒)250 g

二次增菌

023030

四硫磺酸钠煌绿增菌液根蒂根基(TTB)

  瓶(干粉)250g

SR0040

四硫磺酸钠煌绿增菌液配套试剂

  盒(西林瓶)2×5支/盒

CP0300

四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)

  盒(管装)10 mL×20支

023040

亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)

  瓶(干粉)250g

CP0050

亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)

  盒(管装)10 mL×20支

023040P1

亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)

  瓶(干粉)250g

平板分散

023052

亚硫酸铋琼脂(BS)

  瓶(干粉)250g

023070

HE琼脂培育种植提拔基

  瓶(干粉)250g

CP0110

HE琼脂培育种植提拔基

  盒(平板)90 mm×20

029999

木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂(XLD

 瓶(干粉)250g

029999P1

木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂(XLD)

 瓶(颗粒)250 g

CP0180

木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂(XLD)

 盒(平板)90 mm×20

CRM004

沙门氏菌显色培育种植提拔基

 1000 mL

CP0560

沙门氏菌显色培育种植提拔基平板

 盒(平板)90 mm×20

生化鉴定

022080

三糖铁琼脂(TSI)

 瓶(干粉)250g

CP0080

三糖铁斜面

 盒(管装)20支

022110

卵白胨水

 瓶(干粉)100g

075240

卵白胨水

 盒(西林瓶)20支

029230

靛基质试剂

 10 mL×1支/盒

023090

尿素琼脂培育种植提拔基根蒂根基

 瓶(干粉)100g

029100

40%无菌尿素溶液

 盒(西林瓶)2 mL×10支

075150

尿素(冻干)

 10支(冻干)+10支(无菌水)

075330

氰化钾成长尝试管

 盒(西林瓶)20支

075340

氰化钾对照管

 盒(西林瓶)20支

生化鉴定

075280

赖氨酸脱羧酶培育种植提拔基

 盒(西林瓶)20支

075290

氨基酸脱羧酶对照培育种植提拔基

 盒(西林瓶)20支

029110

无菌白腊油

10 mL×1支

075090

山梨醇

 盒(西林瓶)20支

075040

甘露醇

 盒(西林瓶)20支

075180

β-半乳糖苷ONPG

 盒(西林瓶)20支

075100

卫矛醇

 盒(西林瓶)20支

075140

水杨素(水杨苷)

 盒(西林瓶)20支

075190

丙二酸盐

 盒(西林瓶)20支

HKI 02

Easy ID沙门氏菌生化鉴定盒(不含三糖铁)

血清学尝试验

HM42

沙门氏菌乳胶凝集试剂盒

 50 tests

026050

半固体琼脂

 瓶(干粉)250g

075350A

半固体琼脂

 盒(管装)20支

023118

沙门氏菌鞭毛诱导软琼脂

 瓶(干粉)250g

核酸快捷检测试剂盒

KJD05L

沙门氏菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)

 24测试/盒

HANDY PALTE微生物测试片

HP005

沙门氏菌检测片

 20片/包



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