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食物微生物查验GB4789.5-2012 志贺氏菌查验及注重事变

公布时间:2021-11-18      阅读次数:897    分享:

一、志贺氏菌的生物学特性

生物学特性:志贺氏菌属细菌为革兰氏阳性短杆菌,长约2~3μm,宽0.5~0.7μm,无芽胞,无荚膜,无鞭毛,有菌毛,不静止;需氧或兼性厌氧,对养分要求不高,在普通培育种植提拔基(如养分琼脂)上即能成长;最适成长温度35~37℃,相宜pH为6.4~7.8。发酵糖类产酸不产气(福氏和鲍氏志贺菌中的某些血清型偶可发作少许气体)。分为4个群:A群(痢疾志贺氏菌)、B群(福氏志贺氏菌)、C群(鲍氏志贺氏菌)、D群(宋内氏志贺氏菌)。

流行学特色:志贺氏菌发作强烈的内毒素(endotoxin,ET),是一种脂多糖和脂卵白复合物,为志贺氏菌致病的重要致病要素。A群志贺氏菌Ⅰ型能发作一种毒性极强的细菌外毒素称为志贺毒素(Shigatoxin,Stx),与熏染者中毒性腹泻、出血性肠炎、溶血性尿毒症等紧张并发症的发作紧密亲密相关,其毒性可施展阐发为神经毒性、细胞毒性和肠毒性。在我国以福氏和宋内志贺菌惹起的菌痢最为常见。 病人和带菌者是细菌性痢疾的感染源,因为饮食从业职员的带菌,能够使食物净化而造成食物型迸发。因为污水渗入供水体系,也常造成水型的迸发。

二、志贺氏菌的查验

三、培育种植提拔基原理解析

1. 志贺氏菌增菌肉汤培育种植提拔基

培育种植提拔基中除胰卵白胨、葡萄糖外,参加新生霉素作抑菌剂,并参加少许的吐温80作增溶剂,以资助样品的充实涣散。

41℃厌氧培育种植提拔有助于抑止其它杂菌成长。

2. 麦康凯琼脂培育种植提拔基(MAC)

哄骗胆盐来抑止革兰氏阳性细菌的成长;哄骗乳糖发酵,中性红的颜色可把合成乳糖和不合成乳糖的细菌辨别开。

志贺氏菌呈无色菌落,半通明,滑腻,潮湿,圆形,边缘整洁或不齐。

麦康凯琼脂培育种植提拔(MAC)

3.木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐(XLD)琼脂培育种植提拔基

脱氧胆酸钠能够抑止革兰氏阳性细菌和部门大肠杆菌,大都志贺氏菌不克不及发酵木糖,木糖的添加可将志贺氏菌与其它菌株区分开来,是以,志贺氏菌在XLD平板上呈现无色菌落,但少数发酵木糖的志贺氏菌在此平板上会被漏检,XLD平板对宋内志贺氏菌亦有轻度抑止作用。

志贺氏菌通常呈粉白色至无色,半通明,滑腻,潮湿,圆形,边缘整洁或不齐菌落。

木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐(XLD)琼脂菌落特色

4.志贺氏菌显色培育种植提拔基

哄骗非志贺氏菌的特同性的酶,使其与酶底物结合构成差别颜色的菌落,而生化特性反响不沉闷的志贺氏菌经22~28h培育种植提拔后,则构成易于辨认的白色-粉白色(与培育种植提拔基颜色相近)的菌落。

志贺氏菌呈白色/清晰的菌落,巨细约为1~3mm,周围培育种植提拔基变红。

5.三糖铁琼脂培育种植提拔基

该培育种植提拔基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1,只能哄骗葡萄糖的细菌,葡萄糖被合成产酸使斜面先变黄,但因量少,消费的少许酸。因接触空气而氧化,加上细菌成长哄骗培育种植提拔基中含氮物资,天生碱性产物,故斜面厥后又变红。底部因为厌氧状况,酸类不被氧化,仍维持黄色。而发酵乳糖的细菌,则发作大量的酸,使整个培育种植提拔基呈黄色。别的,因某些细菌能合成含硫氨基酸,天生硫化氢,硫化氢和培育种植提拔基中的铁盐反响天生玄色的硫化亚铁积淀。

三糖铁

6.靛基质试验

某些细菌能合成卵白胨中的色氨酸,天生吲哚。吲哚的存在可用显色反响施展阐发进去。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合,构成玫瑰吲哚,为白色化合物。

结果判读:阳性为滴加靛基质试剂后液面当即变玫白色; 阳性为滴加试剂后不变白色。

靛基质试验

7.尿素酶试验

具备尿素酶的细菌合成培育种植提拔基中的尿素,发作大量的氨,使培育种植提拔呈碱性,酚红批示剂在pH6.8时呈黄色,pH8.1呈粉白色。

结果判读:阳性为玫白色; 阳性为淡橙白色-淡黄色。

尿素酶试验

8.赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶试验

具备氨基酸脱羧酶的细菌,能合成氨基酸使其脱羧天生胺(赖氨酸→尸胺)和二氧化碳,使培育种植提拔基变碱,使批示剂显示进去。

结果判读:阳性为试验管为绿色-蓝绿色,对照管变黄色; 阳性为试验管和对照管均变黄色,或均不变色。

赖氨酸脱羧酶试验阳性

9.糖(醇)发酵试验

绝大大都细菌都能哄骗糖(醇)类作为碳源和能源,可是它们在合成糖(醇)的威力上有很大的差距,有些细菌能合成某种糖(醇)并产酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢、甲烷、二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气。酸的发作可哄骗批示剂来断定。

(批示剂为溴甲酚紫)结果判读:阳性为变黄色; 阳性为紫色。

甘露醇发酵试验

10.β-半乳糖苷酶

某些细菌可发作b-半乳糖苷酶,能合成邻硝基酚-b半乳糖苷(ONPG),天生黄色的邻硝基酚。

结果判读:阳性为黄色; 阳性为不变色-淡黄色。

ONPG生化管

11.  葡萄糖铵试验

甄别细菌哄骗铵盐作为独一氮源并合成葡萄糖的试验。溴麝香草酚蓝是批示剂,产酸时培育种植提拔基由绿色变黄色。

结果判读:阳性为黄色; 阳性为绿色。

葡糖糖铵哄骗试验

12.  西蒙氏柠檬酸盐培育种植提拔基

细菌能哄骗柠檬酸盐作为独一的碳源,能在除柠檬酸盐外不含其他碳源的培育种植提拔基上成长,合成柠檬酸盐天生碳酸钠,使培育种植提拔基变碱性。

结果判读:阳性为蓝绿-蓝色; 阳性为绿色。

西蒙氏柠檬酸盐培育种植提拔基试验

13.  黏液酸盐试验

某些细菌能哄骗黏液酸盐,合成产酸,使培育种植提拔基中的溴麝香草酚蓝变黄色。

结果判读:阳性为黄色; 阳性为绿色-蓝绿色。

黏液酸盐试验

四、志贺氏菌的生化鉴定

生化反响

A群:痢疾志贺氏菌

B群:福氏志贺氏菌

C群:鲍氏志贺氏菌

D群:宋内氏志贺氏菌

ß-半乳糖苷酶

-a

-a

尿素

赖氨酸脱羧酶

鸟氨酸脱羧酶

-b

水杨苷

七叶苷

靛基质

-/+

(+)

-/+

甘露醇

+c

棉子糖

甘油

(+)

(+)

d

注:+暗示阳性;-暗示阳性;-/+暗示大都阳性;+/-暗示大都阳性;(+)暗示迟缓阳性;d暗示有差别生化型。

a痢疾志贺1型和鲍氏13型为阳性。

b鲍氏13型为鸟氨酸阳性。

c福氏4型和6型常见甘露醇阳性变种。

附加生化鉴定

因为某些不生动的大肠埃希氏菌(anaerogenic E.coil.)、A-D(碱性-异型Alkalescens-D isparbiotypes)菌的部门生化特色与志贺氏菌相似,并能与某种志贺氏菌分型血清发作凝集。需求进一步做葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、黏液酸盐试验(36℃培育种植提拔24 h~48 h)。

生化反响

A群:痢疾志贺氏菌

B群:福氏志贺氏菌

C群:鲍氏志贺氏菌

D群:宋内氏志贺氏菌

大肠埃希氏菌

A-D菌

 

葡萄糖铵

西蒙氏柠檬酸盐

d

d

黏液酸盐

d

d

注1:+暗示阳性;-暗示阳性;d暗示有差别生化型。

注2:在葡萄糖铵、西蒙氏柠檬酸盐、黏液酸盐试验三项反响中志贺氏菌普通为阳性,而不生动的大肠埃希氏菌、A-D(碱性-异型)菌最少有一项反响为阳性。

 

五、志贺氏菌的血清诊断

志贺氏菌属没有能源,以是没有鞭毛抗原。志贺氏菌属次要有菌体(O)抗原。菌体O抗原又可分为型和群的特同性抗原。

普通采取1.2%~1.5%琼脂培育种植提拔物作为玻片凝集试验用的抗原

在玻片上划出2个约1cm×2cm的地区,挑取一环待测菌,各放1/2环于玻片上的每一地区上部,在此中一个地区下部加1滴抗血清,在另外一地区下部参加1滴生理盐水,作为对照。

再用无菌的接种环或针划分将两个地区内的菌落研成乳状液。将玻片歪斜摇动混合1 min,并对着玄色布景举行察看,假如抗血清中呈现固结成块的颗粒,并且生理盐水中没有发作自凝征象,那末凝集反响为阳性。

假如待测菌的生化特色契合志贺氏菌属生化特色,而其血清学试验为阳性的话,可挑取菌苔于1mL生理盐水做成浓菌液,100℃煮沸15 min~60 min去除K抗原后再查抄。

六、所需培育种植提拔基试剂

用途

货号

称号

规格

增菌

023141

志贺氏菌增菌肉汤

瓶(干粉)250g

SR0380

志贺氏菌增菌肉汤配套试剂(新生霉素)

盒(西林瓶)10支/盒

CP0730

志贺氏菌增菌肉汤(需加配套试剂)

盒(袋装)225 mL×10袋

平板分散

029999

木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂(XLD)

瓶(干粉)250g

029999P1

木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂(XLD)

瓶(颗粒)250g

CP0180

木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐琼脂(XLD)

盒(平板)90 mm×20

022144

麦康凯琼脂

瓶(干粉)250g

024076

麦康凯琼脂培育种植提拔基平板

盒(平板)90 mm×20

CRM011

志贺氏菌显色培育种植提拔基

1000mL

CRM011A

志贺氏菌显色琼脂平板

盒(平板)90 mm×20

生化鉴定

022080

三糖铁琼脂(TSI)

瓶(干粉)250g

CP0080

三糖铁斜面

盒(管装)20支

026050

半固体琼脂

瓶(干粉)250g

075350A

半固体琼脂

盒(管装)20支

CP0150

养分琼脂

盒(管装)20支

024089

养分琼脂平板

盒(平板)90 mm×20

022020

养分琼脂

瓶(干粉)250g

022020P1

养分琼脂(NA)

瓶(颗粒)250g

023090

尿素琼脂培育种植提拔基根蒂根基

瓶(干粉)100g

029100

40%无菌尿素溶液

盒(西林瓶)10支/盒

生化鉴定

075150

尿素(冻干)

盒(西林瓶)10支/盒

075280

赖氨酸脱羧酶培育种植提拔基

盒(西林瓶)20支/盒

075270

L-鸟氨酸脱羧酶培育种植提拔基

盒(西林瓶)20支/盒

075290

氨基酸脱羧酶对照培育种植提拔基

盒(西林瓶)20支/盒

029110

无菌白腊油

10 mL×1支

075180

β-半乳糖苷ONPG

盒(西林瓶)20支/盒

075140

水杨素(水杨苷)

盒(西林瓶)20支/盒

075160

七叶灵(七叶苷)

盒(西林瓶)20支/盒

075040

甘露醇

盒(西林瓶)20支/盒

075230

D-棉子糖

盒(西林瓶)20支/盒

生化鉴定

022110

卵白胨水(靛基质培育种植提拔基,色氨酸肉汤)

瓶(干粉)100g

075240

卵白胨水(靛基质培育种植提拔基,色氨酸肉汤)

盒(西林瓶)20支/盒

029230

靛基质试剂

10 mL×1支

075840

甘油发酵管

盒(西林瓶)20支/盒

075260

葡萄糖铵

盒(西林瓶)20支/盒

023150

葡萄糖铵培育种植提拔基

瓶(干粉)250g

075200

西蒙氏柠檬酸盐

盒(西林瓶)20支/盒

022120

西蒙氏柠檬酸盐培育种植提拔基

瓶(干粉)250g

075521

黏液酸盐测试肉汤

盒(西林瓶)20支/盒

075522

黏液酸盐质控肉汤

盒(西林瓶)20支/盒