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《化装品卫生范例》(2007年版)金黄色葡萄球菌查验

公布时间:2015-10-24      阅读次数:11539    分享:

1  范畴 本范例划定了化装品微生物学查验的基本要求。

本范例合用于化装品样品的采集、保留及供检样品制备。

2  仪器和装备

2.1 天平。

2.2 低压灭菌器。

2.3 振荡器。

2.4 三角瓶,250mL。

2.5 玻璃珠。

2.6 玻璃棒。

2.7 刻度吸管,1mL、10mL。

2.8 研钵或均质器。

2.9 恒温水浴箱。

3  培育种植提拔基和试剂

3.1 生理盐水

身分:

氯化钠       8.5g
蒸馏水加至1000mL

消融后,分装到加玻璃珠的三角瓶内,每瓶  90mL,103.43kPa(121℃  15  lb)20min

低压灭菌。

3.2 SCDLP 液体培育种植提拔基

身分:

酪卵白胨 17g 
大豆卵白胨 3g 
氯化钠 5g 
磷酸氢二钾 2.5g 
葡萄糖         2.5g 
卵磷脂 1g 
吐温  80 7g 
蒸馏水 1000mL 

制法:先将卵磷脂在少许蒸馏水中加温消融后,再与其它身分混合,加热消融,调 pH

为 7.2~7.3 分装,103.43kPa(121℃  15  lb)20min 低压灭菌。注重振荡,使积淀于底层的 吐温 80 充实混合,冷却至 25℃阁下使用。

注:如无酪卵白胨和大豆卵白胨,也可用多胨替代。

3.3 灭菌液体白腊。

3.4 灭菌吐温 80。

3.5 7.5%的氯化钠肉汤

身分:

卵白胨 10g 
牛肉膏 3g 
氯化钠 75g 
蒸馏水加至 1000mL 

制法:将上述身分加热消融,调 pH 为 7.4,分装,103.43kPa(121℃  15  lb)15min 高 压灭菌。

3.6 Baird Parker 平板

身分:

胰卵白胨 10g 
牛肉膏 5g 
酵母浸膏 1g 
丙酮酸钠 10g 
甘氨酸 12g 
氯化锂(LiCl·6H2O) 5g 
琼脂 20g 
蒸馏水 950mL 

pH7.0±0.2

增菌剂的配制:30%卵黄盐水 50mL 与除菌过滤的 1%亚碲酸钾溶液 10mL 混合,保留 于冰箱内。

制法:将各身分加到蒸馏水中,加热煮沸完整消融,冷至  25℃±1℃校订  pH。分装每瓶 95mL,103.43kPa(121℃  15 lb)低压灭菌 15min。临历时加热熔解琼脂,每 95mL 参加 预热至 50℃阁下的卵黄亚碲酸钾增菌剂 5mL,摇匀后倾注平板。培育种植提拔基应是致密不通明的。 使用前在冰箱储存不得跨越 48h±2h。

3.7 血琼脂培育种植提拔基

身分:

养分琼脂 100mL 
脱纤维羊血(或兔血) 10mL

制法:将养分琼脂加热熔化,待冷至  50℃阁下无菌操作参加脱纤维羊血,摇匀,制成 平板,置冰箱内备用。

3.8 甘露醇发酵培育种植提拔基

身分:

卵白胨 10g 
氯化钠 5g 
甘露醇 10g 
牛肉膏 5g 
0.2%麝香草酚蓝溶液 12mL 
蒸馏水 1000mL

制法:将卵白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中,加热消融,调 pH7.4,参加甘露醇和 批示剂,混匀后分装试管中,68.95kPa(115℃  10 lb)20min 灭菌备用。

3.9 兔(人)血浆制备

取 3.8%柠檬酸钠溶液,103.43kPa(121℃  15  lb)30min 低压灭菌,1 份加兔(人)全血 4 份,混匀静置;2000rpm~3000rpm 离心 3min~5min。血球下沉,取下面血浆。

4  样品的采集及注重事变

4.1 所采集的样品,应具备代表性,普通视每批化装品数目巨细,随机抽取相应数目的包装单元。查验时,应划分从两个包装单元以上的样品中共取 10g 或 10mL。包装量小于 20g

的样品,采样量可适当增长样品包装数目。

4.2 供查验样品,应严酷维持原本的包装状况。容器不该有破碎,在查验前不得翻开,防 止样品被净化。

4.3 接到样品后,应当即挂号,编写查验序号,并按查验要求尽快查验。如不克不及实时查验, 样品应放在室温阴凉枯燥处,不要冷藏或冷冻。

4.4 若只要一个样品而同时需做多种阐发,如细菌、毒理、化学等,则宜先掏出部门样品 做细菌查验,再将残剩样品做其它阐发。

4.5 在查验历程中,从翻开包装到局部查验操作竣事,均须避免微生物的再净化和扩散, 所用器皿及质料均应事前灭菌,局部操作应在无菌室内举行,或在相应前提下,按无菌操作 划定举行。

4.6 如检出粪大肠菌群或其它致病菌,自陈述收回之日起该菌种及被检样品应保留一个月。

5  供检样品的制备

5.1 液体样品

5.1.1水溶性的液体样品,可量取 10mL 加到 90mL 灭菌生理盐水中,如样品少于 10mL, 仍按 10 倍浓缩法举行。如为 5mL 则加到 45mL 灭菌生理盐水,混匀后,制成 1:10 检液。

5.1.2油性液体样品,取样品 10mL,先加 5mL 灭菌液体白腊混匀,再加 10mL灭菌的吐

温 80,在 40℃~44℃水浴中振荡混合 10min,参加灭菌的生理盐水 75mL(在 40℃~44℃ 水浴中预温),在 40℃~44℃水浴中乳化,制成 1:10 的悬液。

5.2 膏、霜、乳剂半固体状样品

5.2.1亲水性的样品:称取10g,加到装有玻璃珠及 90mL灭菌生理盐水的三角瓶中,充实 振荡混匀,静置 15min。用其上清液作为 1:10 的检液。

5.2.2疏水性样品:称取10g,放到灭菌的研钵中,加 10mL 灭菌液体白腊,研磨成稀薄状, 再参加 10mL 灭菌吐温 80,研磨待消融后,加 70mL 灭菌生理盐水,在40℃~44℃水浴中 充实混合,制成 1:10 检液。

5.3 固体样品

称取 10g,加到 90mL 灭菌生理盐水中,充实振荡混匀,使其涣散混悬,静置后,取上 清液作为 1:10 的检液。

若有均质器,上述水溶性膏、霜、粉剂等,可称  10g  样品参加  90mL灭菌生理盐水, 均质 1min~2min;疏水性膏、霜及眉笔、口红等,称 10g 样品,加 10mL灭菌液体白腊,

10mL 吐温 80,70mL 灭菌生理盐水,均质 3min~5min。

6  操作步骤

6.1 增菌:取 1:10 浓缩的样品接种到 90mL SCDLP 液体培育种植提拔基中,置36℃±1℃培育种植提拔箱, 培育种植提拔 24h±2h。

注:如无此培育种植提拔基也可用 7.5%氯化钠肉汤。

6.2    分散:自上述增菌培育种植提拔液中,取 1~2  接种环,划线接种在Baird Parker 氏培育种植提拔基,如 无此培育种植提拔基也可划线接种到血琼脂平板,置36℃±1℃培育种植提拔 24h~48h。在血琼脂平板上菌落 呈金黄色,大而突起,圆形,不通明,外表滑腻,周围有溶血圈。在 Baird Parker 氏培育种植提拔基 上为圆形,滑腻,突出,潮湿,直径为  2mm~3mm,颜色呈灰色到玄色,边缘为浅色,周 围为一混浊带,在其外层有一通明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。无意偶尔会碰到 非脂肪消融的相似菌落,但无混浊带及通明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上,置  36℃±1℃培育种植提拔 24h±2h。

6.3 染色镜检:挑取分纯菌落,涂片,举行革兰氏染色,镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏 阴性菌,布列成葡萄状,无芽胞,无夹膜,致病性葡萄球菌,菌体较小,直径约为 0.5m~1m。

6.4 甘露醇发酵试验:取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培育种植提拔基中,在培育种植提拔基液面上参加2mm~3mm的灭菌液体白腊,置36℃±1℃培育种植提拔 24h±2h,金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇 产酸。

5.5 血浆凝集酶试验:吸取 1:4 鲜活血浆 0.5mL,放入灭菌小试管中,参加待检菌 24h±2h 肉汤培育种植提拔物 0.5mL。混匀,放36℃±1℃恒温箱或恒温水浴中,每半小时察看一次,6h 以内 如出现凝块即为阴性。同时以已知血浆凝集酶阴性和阴性菌株肉汤培育种植提拔物及肉汤培育种植提拔基各0.5mL,划分参加灭菌 1:4 血浆 0.5mL,混匀,作为对照。

6  查验结果陈述 凡在上述选择平板上有可疑菌落成长,经染色镜检,证实为革兰氏阴性葡萄球菌,并能

发酵甘露醇产酸,血浆凝集酶试验阴性者,可陈述被检样品检出金黄色葡萄球菌。

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图1:《化装品卫生范例》(2007年版)金黄色葡萄球菌查验流程图

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